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登革熱病毒捕獲法IgG抗體檢測試劑盒

Panbio Dengue IgG Capture ELISA

產品目錄號01PE10

預期用途

Panbio Dengue IgG Capture ELISA用于推斷性定性檢測登革熱病毒（1-4血清型）繼發性感染患者的IgG抗體升高，輔助臨床實驗室診斷出現登革熱病毒感染臨床癥狀的患者，而且應該與Panbio Dengue IgM Capture ELISA 和Dengue Early ELISA聯用。Dengue Early ELISA也可檢測原發性登革熱病毒感染。Panbio Dengue IgG Capture ELISA早可在疾病發作后3天檢測到提示繼發性登革熱感染的高IgG, 水平。然而，準確診斷繼發性感染的峰值檢測窗口是在疾病發作后6-15天。陽性結果是推斷出來的，必須經過病毒分離培養、配對血清分析、免疫組織化學抗原檢測或病毒核酸檢測來確認登革熱病毒感染。

概述

登革熱病毒是黃病毒屬，主要分布于熱帶和亞熱帶地區。世界上一半以上的人口居住于具有登革熱潛在傳播風險的地區，登革熱是導致人類發病和死亡嚴峻的蟲媒病毒疾病¹。登革熱病毒有4種不同但抗原相關的血清型，通過雌蚊（主要是埃及伊蚊、白紋伊蚊傳播和波利尼西亞斑蚊）傳播。

登革熱病毒感染的臨床表現各不相同，從亞臨床表現到致命。依據嚴重程度，該疾病被分為以下等級：非特異性發熱疾病，典型登革熱，登革出血熱（DHF）（1級和2級），和登革休克綜合征（DSS）（3級和4級）¹。典型登革熱的特征是突然發熱并至少伴隨以下2種癥狀：頭痛，眼眶后疼痛，肌痛，關節痛，皮疹，出血表現，和白血球減少癥²。雙相發熱病程常見失眠和厭食，失去味覺或口苦。DHF和DSS是嚴重的潛在致命性并發癥，通常與感染第二種血清型有關³。

在地方性流行登革熱感染的國家，大部分成年患者會出現繼發性登革熱感染⁴。利用ELISA方法檢測登革熱病毒的IgG抗體特異性升高是鑒別繼發性登革熱感染非常重要的診斷方法。繼發性感染患者并發癥的發生幾率較高^5,6。傳統上，血凝抑制試驗（HAI）滴度被用于劃分原發性或繼發性感染。當前的界定方法是采用及時分離至少7天的配對血清標本檢測，急性標本的HAI滴度> 1:1280被認為患者感染了繼發性黃病毒⁷。

Panbio Dengue IgG Capture ELISA是除HAI檢測之外另一種可對繼發性登革熱感染的血清學進行診斷的方法。

如下所示，繼發性登革熱病毒感染的特征表現為高IgG ,水平，同時可能伴隨IgM水平升高⁸。Panbio Dengue IgG Capture ELISA用于檢測登革熱感染的IgG抗體水平相對于閾值特異性升高。該試驗不用于檢測既往感染引起的低水平IgG抗體，這種情況通常見于地方性流行區的較多人群。因此，高IgG ,水平（> 22 Panbio單位）提示繼發性登革熱病毒感染。

檢測原理

血清中存在的登革熱病毒IgG抗體，與微孔測試條（測定板）上聚苯乙烯表面包被的抗人IgG抗體結合。用抗原稀釋劑將濃縮的重組登革熱1-4型抗原溶液稀釋到正確的工作容積。用昆蟲細胞表達系統產生抗原，用特異性單克隆抗體純化抗原。在稀釋后的抗原中添加等體積的辣根過氧化物酶（HRP）標記單克隆抗體（MAb），形成抗原MAb復合物。清洗測定板上的剩余血清，將抗原MAb復合物添加到測定板中。然后這些抗原MAb復合物與血清登革熱特異性IgG抗體結合。在培養完成后清洗微孔，再添加無色的底物系統 - 四甲基聯苯胺/過氧化氫（TMB顯色液）。底物被HRP（如存在）水解后，顯色液變藍。用酸終止反應后，TMB變黃。顯色表示測試樣本中存在抗登革熱IgG抗體。

提供的材料

• 抗人IgG包被微孔 - （測定板）
  （12x8孔）。即用型。未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環境中。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 登革熱1-4型抗原（重組） - 1瓶，無色瓶蓋，包含150μL（紅色）濃縮的1型、2型、3型和4型登革熱病毒抗原。未使用的稀釋抗原必須丟棄。濃縮抗原在有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 清洗緩沖液（20倍） - 1瓶，60mL 20倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水（pH 7.2 – 7.6），含吐溫 20和防腐劑（0.1% Proclin™）。低溫可能結晶。若去除結晶，可在37℃孵育液體至澄清。混合均勻。用19體積的蒸餾水稀釋1體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在2-25℃儲存一周。
• 樣本稀釋劑 – 2瓶， 50 mL（粉色）。即用型。Tris緩沖生理鹽水（pH 7.2 – 7.6），含防腐劑（0.1% Proclin™）和添加劑。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 抗原稀釋劑 – 1瓶，50mL（無色）。即用型。磷酸鹽緩沖液，含防腐劑（0.1% Proclin™和0.005%慶大霉素）。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• HRP標記單克隆抗體示蹤劑 – 1瓶，7mL（綠色）。即用型。辣根過氧化物酶（HRP）標記單克隆抗體示蹤劑，含防腐劑（0.1% Proclin™）和蛋白穩定劑。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• TMB顯色液（TMB） - 1瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯苯胺和過氧化氫的混合物，存放于枸櫞酸鹽緩沖液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 反應控制品 – 1瓶，紅色瓶蓋，200μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 校準品 – 1瓶，黃色瓶蓋，850μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 陰性質控品 – 1瓶，綠色瓶蓋，200μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 終止液 – 1瓶，紅色瓶蓋，15mL。即用型。1M磷酸。有效期內儲存于2-25℃可保持穩定。

Proclin™ 300是Rohm 和Haas公司的注冊商標。

需要但未提供的材料

• 精確、可調節的微量移液器，含一次性吸液頭（5-1000 μL容積）
• 去離子水
• 標板清洗系統
• 酶標儀，含450nm濾波器
• 計時器
• 刻度量筒
• 燒瓶
• 試管或微滴定板，用于稀釋血清

注意事項

用于體外診斷

• 在制備質控品的過程中使用的所有人源性材料已經過人類免疫缺陷病毒1/2（HIV 1 /2）抗體、丙肝（HCV）和乙肝表面抗原的檢測，結果為陰性。但是，任何測試方法都不能*確信，且所有人源性質控品和抗原都應按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預防中心以及美國國立衛生研究院建議將潛傳染原按照生物安全二級處理。
• 該測試只能使用血清執行。尚未建立使用全血、血漿或其它標本基質的方法。
• 不可使用黃疸或脂血癥血清，以及出現溶血或微生物生長的血清。
• 不可加熱，否則血清將失去活性。
• 在開始檢測前所有試劑必須平衡至室溫（20-25℃）。檢測受溫度變化的影響。微孔板在達到室溫（20-25℃）之前不可從密封袋中取出。
• 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉移試劑可能導致污染。
• 未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環境中，否則將產生錯誤結果。
• 底物系統：

• 由于TMB易受金屬離子的污染，所以底物系統不能與金屬表面接觸。
• 避免長時間陽光直射。
• 有些清潔劑可干擾TMB的性能。
• TMB可能呈現淡藍色，這不影響底物的活性或測定結果。

 登革熱病毒捕獲法IgG抗體檢測試劑盒